稳定细胞株构建
发布时间 :2017-07-30
筛选得到可稳定表达目的蛋白;筛选得到稳定沉默特定基因的细胞株。

       外源基因在细胞中的表达可分为两大类,一类是瞬时表达,一类是稳定表达。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中,虽然可以达到高水平的表达,但通常只持续几天;后者外源DNA整合到宿主细胞染色体上,宿主细胞可长期表达目的基因。

       建立稳定细胞株,一种方法是根据基因载体的抗性标志选用筛选药物。最常用的抗性标记基因有潮霉素(hygromycin)、新霉素(neomycin)和嘌呤霉素(puromycin);另一种方法是荧光筛选,通过克隆化的方式来筛选。

       目前构建稳定细胞株常用慢病毒方法:利用慢病毒整合到宿主基因组的特性来筛选稳定株(可以在短时间内获得高效率的稳定细胞株)。




客户提供

① 待稳定转染细胞株

② 稳转质粒(可由伯信提供服务);

③ 慢病毒(可由伯信提供服务);


伯信提供

① 稳定转染细胞株,≥5×106细胞

② 目的基因稳定表达或沉默载体构建报告(实验仪器、试剂、方法、结果、结论);

③ 目的基因稳定表达或沉默效率验证报告(实验仪器、试剂、方法、结果、结论)。

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