CUT&Tag
发布时间 :2023-06-07
研究DNA-蛋白质互作

Cleavage Under Target & Tagmentation (CUT&Tag)是一种新兴的研究 DNA-蛋白质互作的方法,该方法使用与 Protein A/G 融合的 Tn5 转座酶,而该融合蛋白能与抗体结合,Tn5 在激活后剪切结合位点两边序列的同时能加上测序接头,从细胞中回收 DNA 后直接进行 PCR 扩增即可完成文库构建。



                                    



基本原理


在活细胞状态下使用 ConA 磁珠固定细胞,加入洋地黄皂苷(Digitonin)透化细胞膜,依次进行一抗、二抗、ProteinA/G 融合的转座体的孵育,随后加入 Mg2+激活转座酶进行片段化反应,反应产物经过 DNA 提取、PCR 扩增完成二代测序文库的构建。



技术优势


1、操作简便:全流程优化,磁珠提取省时安全高效;
2、信噪比高:背景远低于 ChIP-Seq;
3、样本投入量低:技术革新,细胞起始量低;
4、实验重复性好:平行样本之间的重复性好;

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