CUT&Tag
发布时间 ：2023-06-07
研究DNA-蛋白质互作
Cleavage Under Target & Tagmentation (CUT&Tag)是一种新兴的研究 DNA-蛋白质互作的方法，该方法使用与 Protein A/G 融合的 Tn5 转座酶，而该融合蛋白能与抗体结合，Tn5 在激活后剪切结合位点两边序列的同时能加上测序接头，从细胞中回收 DNA 后直接进行 PCR 扩增即可完成文库构建。
基本原理
在活细胞状态下使用 ConA 磁珠固定细胞,加入洋地黄皂苷（Digitonin）透化细胞膜，依次进行一抗、二抗、ProteinA/G 融合的转座体的孵育，随后加入 Mg2+激活转座酶进行片段化反应，反应产物经过 DNA 提取、PCR 扩增完成二代测序文库的构建。
技术优势
1、操作简便：全流程优化，磁珠提取省时安全高效;
2、信噪比高：背景远低于 ChIP-Seq;
3、样本投入量低：技术革新，细胞起始量低;
4、实验重复性好：平行样本之间的重复性好;
