miR-3188 regulates nasopharyngeal carcinoma proliferation and chemosensitivity through aFOXO1-modulated positive feedback loop with mTOR–p-PI3K/AKT-c-JUN_

miR-3188 regulates nasopharyngeal carcinoma proliferation and chemosensitivity through aFOXO1-modulated positive feedback loop with mTOR–p-PI3K/AKT-c-JUN

发布时间：2016-07-05

研究对象：miR-3188 期刊：nature communications 影响因子：11.47 合作单位：南方医科大学发表时间：2016年4月

摘要

The biological role of miR-3188 has not yet been reported in the context of cancer. In this study, we observe that miR-3188 not only reduces cell-cycle transition and proliferation, but also significantly prolongs the survival time of tumour-bearing mice as well as sensitizes cells to 5-FU. Mechanistic analyses indicate that miR-3188 directly targets mTOR to inactivate p-PI3K/p-AKT/c-JUN and induces its own expression. This feedback loop further suppresses cell-cycle signalling through the p-PI3K/p-AKT/p-mTOR pathway. Interestingly, we also observe that miR-3188 direct targeting of mTOR is mediated by FOXO1 suppression of p-PI3K/p-AKT/c-JUN signalling. In clinical samples, reduced miR-3188 is an unfavourable factor and negatively correlates with mTOR and c-JUN levels but positively correlates with FOXO1 expression. Our studies demonstrate that as a tumour suppressor, miR-3188 directly targets mTOR to stimulate its own expression and participates in FOXO1-mediated repression of cell growth, tumorigenesis and NPC chemotherapy resistance

关键词：miR-3188；肿瘤；细胞周期；mTOR；p-PI3K/p-AKT/p-mTOR通路；FOXO1

研究背景：

miRNA在发育，细胞分化，增殖，细胞周期控制和细胞死亡中发挥中重要的作用。miRNA也与很多疾病有着紧密的关系，这些疾病包括肿瘤。在众多的miRNA中，miR-3188在肿瘤起始和进展中的作用并没有得到深入的研究。

鼻咽癌是起源于鼻腔上皮细胞的一种肿瘤类型，在东亚和非洲的某些区域常见，其与很多因素相关，包括病毒，饮食和遗传背景等，近年来发现miRNA也在这类肿瘤的发生中起着重要的作用。例如，病毒编码的miRNA BART1通过调控PTEN依赖的信号通路诱导肿瘤的恶化。

FOXO1是转录因子，具有肿瘤抑制因子的作用，其可以被AKT1磷酸化失活，介导其由细胞核进入细胞质。最近的发现表明LMP1的抗癌活性是通过AKT1和下游的磷酸化FOXO1信号通路实现的。但是FOXO1的抗肿瘤的信号通路并没有深入的研究。

本研究发现miR-3188靶向鼻咽癌细胞中的mTOR和FOXO1，发现FOXO1 miR-3188-mTOR–p-PI3K/AKT-c-JUN信号通路，这条通路被FOXO1调节。激活这条通路抑制肿瘤的增殖，增加其对5氟尿嘧啶的敏感性。

技术流程图：

伯信合作技术

EMSA和ChIP-PCR实验共同确认miR-3188上的c-JUN转录因子结合位点：

（c）EMSA实验：提取SUNE1和HONE1-EBV细胞的核蛋白，分别与不同的DIG-ddUTP-标记的寡核苷酸探针 (lanes 2–6, 8–12)孵育，在lanes 1 和 7中，用自由探针标记的c-JUN作为对照。lanes 6 和12,相对于lanes 2 和 8是加入了100倍过量的非标记的c-JUN-WT探针竞争c-JUN的结合；lanes 3-5,和lanes 9-11相对于lanes 2 和 8是加入了100倍过量的非标记的突变的c-JUN-A, c-JUN-B 和 c-JUN-C探针。

（d）ChIP实验：通过c-JUN抗体的ChIP，ChIP产物分别通过PCR扩增c-JUN的结合位点A,B和C，凝胶电泳的结果证实了miR-3188的启动子区域具有c-JUN转录因子结合位点。

原位杂交实验证实miR-3188 在NPC 和 NP 样品中的表达.：

(a) 在 NP 样品中miR-3188的低表达; (b) 在 NP 样品中miR-3188的高表达;

参考文献

Zhao M, Luo R, Liu Y, et al. miR-3188 regulates nasopharyngeal carcinoma proliferation and chemosensitivity through a FOXO1-modulated positive feedback loop with mTOR-p-PI3K/AKT-c-JUN[J]. Nature Communications, 2016, 7.

原文链接

http://www.nature.com/articles/ncomms11309