实验流程大揭秘
大家好，今天我们来聊一聊表观遗传学中的明星实验——RIP实验（RNA Binding Protein Immunoprecipitation Assay），也就是RNA结合蛋白免疫沉淀实验。这个实验可是研究细胞内RNA与蛋白结合情况的强大工具，能够帮助我们深入理解转录后调控网络的动态过程哦！
RIP的实验原理：
RIP 运用针对目标蛋白的抗体沉淀相应的 RNA-蛋白复合物，经过RNA分离纯化，然后逆转录或 构建 cDNA 文库，最后利用基因特异性分析技术（PCR、qRT-PCR）或高通量分析技术（高通量测序、基因芯片），分析结合在复合物上的 RNA 类型及数量。
RIP 可应用于的研究领域包括：
1. 蛋白质与 RNA 互作研究；
2. miRNA靶基因分析；
3. 增强子RNA(eRNA)转录调控分析。
一、实验流程介绍
（详见RIP试剂盒说明书（Bes5101，BersinBio））
1、细胞收集与裂解
收集2×107细胞样品，每个 RIP 实验至少使用 1×107细胞。
若为组织样本，先进行液氮研磨，再裂解。
裂解液应含有适当的盐、离子、蛋白酶抑制剂和RNA酶抑制剂，以保持RNA和蛋白质的完整性。
2、去除DNA
加入细胞裂解液37℃温育。
3、平衡 protein A/G 磁珠
此步骤可在抗体过夜孵育之后操作。
4、免疫沉淀
将细胞裂解样品按照 0.8 mL（IP）、0.8 mL（IgG）、0.1 mL（Input）分成三份，Input 样品-80℃保存备用；
IP、IgG 样品分别加入实验抗体和等量的IgG 抗体， 4℃孵育16 h（过夜），再加入平衡好的protein A/G磁珠；
每 RIP 样品抗体使用量请参考抗体说明书（1~5 µg）；
RIP 实验抗体需为 IP 级；
RIP 样品：抗体免疫目标蛋白质；
IgG 样品：阴性对照组，兔抗 1µg/µL（试剂盒已配备）。
5、提取RNA
RNA -80℃、cDNA -20℃保存备用。
6、RNA检测
检测RNA的浓度。
7、结合RNA效率验证（PCR和qPCR）
mRNA/lnc RNA qPCR 阴性对照基因为 GAPDH 或β-actin，miRNA qPCR 阴性对照基因为 U6。
8、结合RNA 类型分析
高通量测序技术检测 RNA 类型。
因不同蛋白结合的 RNA 量以及不同公司对 RNA 样品测序浓度和总量的要求不同，如果浓度和总量未达到测序要求，可以根据测序要求量提高实验细胞数量，按照说明书中规定的细胞数量与试剂的比例重复实验。
二、好物推荐
产品介绍：
RNA Immunoprecipitation（RIP）是研究细胞内RNA与蛋白质结合的技术，是了解转录后调控网络动态过程的有力工具，可应用于miRNA调控靶点、RNA 与 RBPs（RNA结合蛋白）互作等研究。
伯信 RIP Kit分为：
Bes5101(S) RIP Kit 12T
Bes5101(N) RIP Kit 40T
技术流程：
结果实例：
产品优势：
1. 伯信独立研发。
2. 提供优化的磁珠，适于免疫沉淀RNA-蛋白复合物。
3. 高品质，稳定性好，
4. 结果准确，重复性好。
5. 操作简单，快速省时。
