ALKBH5-mediated m6A modifcation of circCCDC134 facilitates cervical cancer metastasis by enhancing HIF1A transcription《Journal of Experimental & Clinical Cancer Research》(IF=12.658)

背景：

转移是子宫颈癌(CC)死亡的主要原因。环状rna已被证明在癌中的生物学中起着至关重要的作用。然而，环状rna在宫颈癌转移中的表达和功能尚不清楚。

方法：

在本研究中，我们鉴定了一种具有n6-甲基腺苷(m6A)修饰的circccdc134，通过circRNA-Seq和qPCR，其在CC组织中的表达增加。

CircCCDC134在CC中的上调是通过alkbh5介导的m6A修饰来调节的，这以ythdf2依赖的方式增强了其稳定性。

功能实验表明，circCCDC134在体内外均能增强肿瘤的增殖和转移。

为了全面鉴定RNA结合蛋白，我们使用circRNA下拉和质谱(ChIRP-MS)、染色质免疫沉淀-seq(ChIp-seq)、RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)和荧光素酶报告分析来进行机制研究。

结果：

结果显示，circCCDC134在细胞核中招募p65，并作为miR-503-5p海绵调节细胞质中MYB的表达，最终刺激HIF1A转录，促进CC的生长和转移。

结论：

提示circCCDC134是一个重要的治疗靶点，为探索circcCCDC134在CC中的致癌机制提供了新的调控模型。

m6A修饰在环状rna的转录后调控和生物发生中起着关键作用，分析发现circCCDC134有许多m6A修饰位点。

为了进一步探索这一点，研究团队用TRAP、RIP、meRIP等技术进行分子调控机制研究。

TRAP分析和质谱分析来筛选circccdc134相互作用的蛋白和全面识别RNA结合蛋白；circCCDC134与多种蛋白合作，包括ALKBH5和YTHDF2；ALKBH5蛋白和YTHDF2蛋白可以与circCCDC134-MS2结合;circRNA下拉分析结果显示，miR-503-5p可以特异性地结合circCCDC134。

RIP检测结果表明，ALKBH5和YTHDF2都能与circCCDC134相互作用；运用m6A RNA免疫沉淀(MeRIP)定量circCCDC134的m6A水平，m6A qPCR检测circCCDC134的m6A甲基化状态；同时RIP检测也表明，与IgG组相比，Ago2组中circCCDC134和miR-503-5p的富集增加。

研究团队证明了circCCDC134不仅通过ceRNA机制发挥功能，而且通过招募p65发挥作用，ircCCDC134将p65招募到细胞核，并作为miR-503-5p海绵调节细胞质中MYB的表达，最终刺激HIF1A转录，促进CC的生长和转移。

强调了m6A去甲基化酶在circCCDC134表达中的吸引力价值，以及circCCDC134在增强细胞质和细胞核中HIF1A转录中的关键作用。

作者使用伯信生物明星产品TRAP和RIP以及MeRIP三款试剂盒进行了上述分子互作调控机制的研究。

原文链接：https://jeccr.biomedcentral.com/articles/10.1186/s13046-022-02462-7